page_banner

זיהוי חומצת גרעין ערך Ct כמותי פלואורסצנטי - פרמטר אהבה-שנאה

זיהוי חומצת גרעין ערך Ct כמותי פלואורסצנטי - פרמטר אהבה-שנאה

"התוכנית החדשה לאבחון וטיפול בדלקת ריאות של וירוס כלילית (מהדורה תשיעית ניסוי)" משתמשת בערך Ct ≥35 לזיהוי חומצות גרעין כאחד הבסיסים החשובים לשחרור של ניהול בידוד או פריקה.אז מה מייצג ערך ה-Ct של ערכת זיהוי חומצות הגרעין?האם ערכי Ct של ערכות שונות ברי השוואה?האם ככל שערך Ct נמוך יותר, כך הביצועים של הערכה טובים יותר?
ערך Ct (Threshold Cycle, Ct) הוא מספר מחזורי ה-PCR כאשר עוצמת אות הקרינה הכמותי בזמן אמת עולה על הסף שנקבע.ערכות זיהוי חומצות גרעין לוקחות את הכתר החדש כדוגמה.עבור אותה תגובה של אותה ערכה לזיהוי שתי דגימות המכילות וירוסים, A ו-B, גודל ערך ה-Ct מייצג, במידה מסוימת, את מספר העותקים של הגן הנגיפי, כלומר את העומס הנגיפי.ככל שה-Ct של מדגם B נמוך יותר, כך העומס הנגיפי גבוה יותר.ערך ה-Ct עומד ביחס הפוך לעומס הנגיפי ולזיהום שלו.לא ניתן לשפוט את היתרונות והחסרונות של ערכות כמותיות שונות של הקרינה בזמן אמת רק לפי גודל ערך ה-Ct, מכיוון שערכי ה-Ct של ערכות שונות אינם ברי השוואה.הערכת הביצועים של הערכה צריכה להימדד מהיבטים של רגישות (מגבלת זיהוי מינימלית), ספציפיות, דיוק, יציבות ויישום אבחון.לכל יצרן ריאגנטים יש שמונה עשר סוגים משלו של אומנויות לחימה, ויש להם כוחות קסם משלהם ביישום, אז לא אכנס לפרטים כאן.
עבור מכשירי/מערכות ניתוח PCR כמותיים קונבנציונליים בזמן אמת (QPCR), רכישת ערכי Ct והשימוש הנרחב שלהם ביישומי זיהוי פתוגנים מוכרים לכולם.עם התפתחות התעשייה והתקדמות הטכנולוגיה, ציוד QPCR וריאגנטים נתקלו בהזדמנויות ואתגרים.Yiou Think Tank (דוח מחקר 2021 על תעשיית הבדיקות הגנטיות של סין: טכנולוגיה) ניתח שרוב החברות בתעשיית ה-QPCR של ארצי מתמודדות עם בעיות נפוצות המבוססות על טכנולוגיה.בתגובה לבעיות אלו, הפתרונות מתחלקים בעיקר לשני סוגים: האצת שיפור הטכנולוגיה ופריסה של טכנולוגיות חדשות.
POCT לאבחון מולקולרי QPCR הוא אחד מכיווני הפיתוח של התעשייה, ושיפור הביצועים הוא גורם חשוב להאצת יישום הטכנולוגיה.עבור ציוד POCT עם תפוקת דגימה אחת של QPCR, כיצד לייעל את ערך Ct של פרמטר המפתח של תגובה בודדת במו"פ?אותו ציוד, אותה מערכת תגובה ואותו ריכוז תבנית, תיאורטית ככל שערך ה-Ct של תגובה בודדת גדול יותר, כך היעילות של האנזים בתגובה נמוכה יותר.
בתהליך של שיפור היעילות של תגובת האנזים ואופטימיזציה של ערך Ct, ניתן לנתח תחילה עקומת הגברה כמותית אופיינית של 40 מחזורי PCR.עקומת ההגברה באיור שלהלן מחולקת לשלב רקע הקרינה, שלב הגברה אקספוננציאלי, שלב ליניארי ושלב מישור.על מנת להשיג רקע קרינה נמוך יותר, ככל האפשר כדי להבחין בינו לבין ערך הקרינה של הגברה אקספוננציאלית מוקדמת, יש צורך לבדוק מנשא החומרים המתכלים של התגובה, בדיקת תכנון הפריימר ומערכת חיץ התגובה.תקופת ההגברה האקספוננציאלית היא התגובה הישירה ביותר של פעילות האנזים, והיא גם ההוכחה לתיאום המושלם של ציוד POCT, נושאי תגובה וריאגנטים.בשלב זה, יש להתאים ולבדוק את בקרת הטמפרטורה של הציוד, רכישת וניתוח אותות אופטיים, תאימות ביולוגית של הספקים וביצועי המערכת של ריאגנטים בכל ההיבטים.לבסוף, כל ההגברה הושלמה, והתוצאות חייבות להיות מוצגות באמצעות אלגוריתם נתונים קפדני כדי לקבל ערך Ct סביר.
קו CT
צעד קטן באופטימיזציה של ערך ה-Ct הוא אינספור השלבים של אנשי המו"פ.בחרדה ובהתרגשות של היום והלילה, בכל פעם "ההרים והנהרות אינם נראים בשום מקום, הערבות כהות והפרחים בהירים ויש עוד כפר", מה שנותן לנו את האומץ והתשוקה להתקדם קדימה. שוב.


זמן פרסום: 29 בספטמבר 2022